“隔壁的實驗室又發(fā)文章了，我們困在處理數(shù)據(jù)這一環(huán)，這幾家的試劑盒檢測數(shù)據(jù)怎么都不一樣？"小編每當(dāng)聽到這句話，每次感受都不同。對那些努力鉆研數(shù)據(jù)的學(xué)者表示深深的同情。那么，造成試劑盒檢測數(shù)據(jù)不一樣的原因，除了一些實驗操作、實驗環(huán)境等客觀因素外，還有試劑盒質(zhì)量參數(shù)，如重復(fù)率、批內(nèi)差、批間差、線性區(qū)間、準(zhǔn)確度（回收率）等。但是，最重要的影響因素可能是作為定量標(biāo)尺的標(biāo)準(zhǔn)品。所以，下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測數(shù)據(jù)的差異和關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)品的幾點疑惑。
定量ELISA試劑盒如何進行校準(zhǔn)？
利用國際機構(gòu)的參考試劑進行校準(zhǔn)
目前，定量ELISA試劑盒校準(zhǔn)方法為應(yīng)用NIBSC/WHO推薦的參考試劑（reference reagent）對試劑盒的定量單位進行校準(zhǔn)。例如，WHO Reference Reagent，Islet Cell Antibodies， NIBSC code: 97/550。其單位規(guī)定為：每安瓿為20單位胰島細胞抗體（Islet cell antibodies）；或每安瓿為100單位抗GAD65；或每安瓿為100單位抗IA-2。
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精準(zhǔn)定量的基石之一：嚴格標(biāo)準(zhǔn)品生產(chǎn)
市售ELISA試劑盒的檢測指標(biāo)呈多樣化態(tài)勢，至今已知的測定項目種類雖遠遠多于NIBSC/WHO推薦的參考試劑，但只有嚴格遵守參考試劑的定量單位所生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)品（如前文提到的英國國家生物制品檢定所NIBSC提供的參考試劑）才是生產(chǎn)高質(zhì)量定量ELISA試劑盒的前提條件之一。但是不同廠商的技術(shù)路線和品控標(biāo)準(zhǔn)不同，會導(dǎo)致成品的性能存在差異，進而造成檢測數(shù)據(jù)的差異。RSR公司的自身抗體ELISA檢測試劑盒在標(biāo)準(zhǔn)品生產(chǎn)中每個環(huán)節(jié)，嚴格監(jiān)控是否符合以NIBSC參考試劑定標(biāo)的質(zhì)控范圍，因此保證售出的RSR試劑盒定量準(zhǔn)確，高特異性，結(jié)果可重復(fù)性高。
精準(zhǔn)定量的基石之二：高度純化重組蛋白
目前，國內(nèi)外的雙抗原夾心法ELISA試劑盒所用抗原大多數(shù)屬于純化的重組蛋白抗原，競爭法ELISA則更加多樣化，既可能為純化的重組蛋白抗原，也可能為天然蛋白抗原提取物。對此，有些實驗者擔(dān)憂試劑盒中的抗原為何不使用天然蛋白，重組蛋白是否會影響檢測結(jié)果？ELISA試劑盒選擇純化重組蛋白為抗原的主要原因：
第一，天然蛋白均存在于復(fù)雜的生物樣本中，大多數(shù)在細胞或組織中表達量可能極少，不適于進行高度純化或者純化成本高昂，無法獲得大量的天然蛋白。
第二，為保證ELISA試劑盒檢測中抗體和抗原的特異性結(jié)合，在研究之初，通過篩選不同重組蛋白，使樣本中的抗體與重組蛋白抗原間的親和力和特異性達到最佳。
第三，隨著蛋白表達和純化技術(shù)的發(fā)展，高度純化的重組蛋白和天然蛋白具有很高的活性相似度，特別是采用真核細胞表達系統(tǒng)，如酵母或昆蟲細胞等，高度純化的重組蛋白具有更接近自然狀態(tài)的空間構(gòu)象和生物活性。
精準(zhǔn)定量的基石之三：科學(xué)生物樣本驗證
隨著國內(nèi)生物技術(shù)的發(fā)展，自主研發(fā)蛋白表達純化、抗體制備等ELISA試劑盒開發(fā)技術(shù)也在不斷進步。除了應(yīng)用NIBSC/WHO推薦的參考試劑對試劑盒進行校準(zhǔn)外，也可用一些暫無機構(gòu)認可，但背景信息完整的生物樣本進行驗證。按照科學(xué)研究方法，采用不同種屬、性別、生命周期階段、種類等因素的生物樣本分別進行驗證。
如何正確使用ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品？
ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品需要與其他試劑盒主要組分和待測樣本達到相同實驗條件。請?zhí)崆?/span>30分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫(20-25℃)，如果試劑盒需分多次使用，請僅取出本次實驗所需的酶標(biāo)板條和試劑，剩余板條和試劑需按照條件保存。
RSR ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品可直接使用，無需現(xiàn)用現(xiàn)配，且保存條件與試劑盒一致即可。
RSR研發(fā)總部
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