谷氨酸脫羧酶自身抗體ELISA試劑盒實驗是目前應(yīng)用廣酶免疫學(xué)技術(shù)方法
更新時間:2019-01-11 點擊次數(shù):1066次
谷氨酸脫羧酶自身抗體ELISA試劑盒是將抗原的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。在測定中一般要準(zhǔn)備合理的計劃準(zhǔn)備好試劑,ELISA試劑盒在使用前與室溫平衡,在溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。滿足于生物化學(xué)、分子生物學(xué) 、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物實驗需求,不用于臨床診斷。
谷氨酸脫羧酶自身抗體ELISA試劑盒實驗操作簡單、快速、敏感性高、能定性及半微量、微量、超微量定量分析,是目前應(yīng)用廣酶免疫學(xué)技術(shù)方法。
谷氨酸脫羧酶自身抗體ELISA試劑盒標(biāo)本:血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
1)血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。
仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4)細胞培養(yǎng)上清:
A、檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細收集上清。
B、檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并 放出細胞內(nèi)成份。
離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5)組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。
加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3087轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
谷氨酸脫羧酶自身抗體ELISA試劑盒使用注意事項:
1.ELISA試劑盒檢測前,檢查各種儀器,打開酶標(biāo)儀,穩(wěn)定20分鐘左右。
2.檢測樣本要澄清,不能含雜物,否則會直接影響結(jié)果。
3.實驗開始前要將試劑盒取出,室溫放置30-40分鐘,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使檢測結(jié)果更為穩(wěn)定。
4.盡量做雙標(biāo)準(zhǔn)實驗,這樣可以保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
5.底物具有毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,要避免接觸。
6.
谷氨酸脫羧酶自身抗體ELISA試劑盒實驗中,要使底物避光保存,酶標(biāo)板均可拆卸,多余的部分應(yīng)密封好,低溫保存。