胰島自身抗體是1型糖尿病(T1D)的特異性血清學(xué)標(biāo)志物，是臨床醫(yī)生確定臨床分型、預(yù)測(cè)胰島素治療需求、識(shí)別有T1D風(fēng)險(xiǎn)的受試者的重要工具，也是觀察性研究(如(TEDDY)[9]、BABYDIAB[10]和TrialNet[11])的終點(diǎn)。TEDDY研究已證實(shí)胰島素自身抗體（IAA）是2歲以下新發(fā)T1D兒童相關(guān)性最高的抗體，而谷氨酸脫羧酶抗體（GADA）更多見于2歲以上新發(fā)患者[9]。
用于自身抗體聯(lián)合測(cè)定的ELISA特別適用于人群篩選需求，只有在聯(lián)合檢測(cè)中結(jié)果為陽(yáng)性的樣本才需要進(jìn)一步檢測(cè)單項(xiàng)自身抗體，從而減少成本、時(shí)間、人力資源和環(huán)境影響。RSR公司的3 Screen ICA™用于谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)、酪氨酸磷酸酶抗體IA-2 (IA-2A)和鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白8 抗體(ZnT8A)的聯(lián)合檢測(cè)，2 Screen ICA™用于GADA和IA-2A的聯(lián)合檢測(cè)。這兩款產(chǎn)品均參與了糖尿病自身抗體標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃(DASP)和國(guó)際自身抗體標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃(IASP)組織的性能評(píng)估。
本研究的主要目的是評(píng)估3 Screen ICA™和2 Screen ICA™在瑞典人群樣本中的靈敏度和特異性，以期在未來(lái)進(jìn)行篩查研究。此外，該研究還評(píng)估了IAA和ICA是否有助于提高靈敏度，以進(jìn)行了RBA和ELISA法在GADA、IA-2A和ZnT8A檢測(cè)上的一致性評(píng)價(jià)。
材料和方法
1. 患者分組：
T1D組：納入100例瑞典T1D的患者，其中，93例患者在確診當(dāng)天進(jìn)行了血樣采集，3例患者在診斷后一天內(nèi)進(jìn)行了采樣，4例患者的T1D病程時(shí)間未知。在該研究組中，50例患者為15歲以下兒童(中位年齡8.8歲;范圍2.3 - 14.7;男/女: 27/23=1.17)，50例為青少年和成人(中位年齡16.5歲;范圍15.1 -41;男/女: 32/18 = 1.78)。
健康對(duì)照組：納入200名健康對(duì)照，包括100名兒童和100名成人。對(duì)照組兒童的中位年齡為12.6歲，范圍為11.9-13.6，男/女: 50/50=1.00；成人中位年齡42.5歲，范圍21 - 65，男/女：59/41=1.44。
2. 檢測(cè)方法
ELISA:酶聯(lián)免疫法；RBA：放射免疫法；IF：免疫熒光法
結(jié)果
RBAs、ICA-IF和ELISA的結(jié)果匯總見表1和表2。3 Screen的靈敏度為93%，特異度為97.5%；2 Screen的靈敏度為91%，特異度為98.5%。93例初篩陽(yáng)性患者中，多數(shù)為多種自身抗體陽(yáng)性，其中72%(67/93)同時(shí)為GADA和IA-2A陽(yáng)性，57%(53/93)為三種自身抗體(GADA、IA-2A和ZnT8A)陽(yáng)性。在T1D篩查陰性的7例中，僅有1例呈GADA ELISA單項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性。
在健康對(duì)照中，僅有1例(0.5%)存在多種自身抗體(IA-2A和ZnT8A)陽(yáng)性。
在13例T1D患者和2名健康對(duì)照中IAA呈陽(yáng)性。
表1 100例1型糖尿病患者的胰島β細(xì)胞特異性自身抗體結(jié)果
表2 200名健康對(duì)照的胰島β細(xì)胞特異性自身抗體結(jié)果。
IA-2A RBA的靈敏度為78%。GADA RBA的加入提高了12%靈敏度，將該方法學(xué)整體靈敏度提高至90%，而ZnT8A RBA (R/W/Q中的任何一種)的加入使靈敏度進(jìn)一步提高到 91%。相比之下，添加IAA和ICA-IF結(jié)果并沒(méi)有比使用其他檢測(cè)方法獲得更高的靈敏度(表1)。
2 Screen和3 Screen兩種檢測(cè)方法最一致(Kappa=0.97)。IA-2A RBA和IA-2A ELISA兩種檢測(cè)方法的一致性最好(Kappa=0.96)。
討論
研究者采用了6種RBA、1種IF和5種ELISA對(duì)100名T1D患者和200名健康對(duì)照的胰島β細(xì)胞特異性自身抗體進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3 Screen方法表現(xiàn)優(yōu)異，其靈敏度(93%)和特異性(97.5%)最高。2 Screen和3 Screen的檢測(cè)靈敏度優(yōu)于任何RBA。
相比于放免法，GADA ELISA擁有更高的檢出率(84% vs 77% GADA RBA)，大多數(shù)(76%)患者在兩種GADA檢測(cè)方法中均呈陽(yáng)性，而8例患者僅通過(guò)ELISA檢測(cè)為GADA陽(yáng)性，1例僅通過(guò)GADA RBA檢測(cè)為GADA陽(yáng)性。
相比于放免法(61%)，ZnT8A ELISA (ZnT8R和ZnT8W變體)可在更多(75%)T1D患者中檢測(cè)出陽(yáng)性。IA-2A ELISA和RBA鑒定出相同數(shù)量(78%)的陽(yáng)性患者。
3 Screen適用于人群篩查。除免疫項(xiàng)目常用的血清樣本外，經(jīng)Ca2+處理的EDTA血漿也可以得到可靠的結(jié)果[24,25]。在樣品中加入血紅蛋白、生物素、脂肪乳劑或膽紅素對(duì)結(jié)果沒(méi)有顯著影響，這表明該檢測(cè)不容易受到這些物質(zhì)的干擾。
綜上所述，本研究顯示了3 Screen優(yōu)異的性能，具有較高的檢測(cè)靈敏度和特異性，可用于健康人群中對(duì)三種自身抗體（GADA、IA-2A和ZnT8A）的初步篩查。在3 Screen篩查陽(yáng)性的情況下，需進(jìn)一步對(duì)抗體進(jìn)行單項(xiàng)檢測(cè)，以識(shí)別具有進(jìn)展為T1D高風(fēng)險(xiǎn)的多重自身抗體陽(yáng)性患者。經(jīng)3 Screen篩查試驗(yàn)陰性的樣本通常不需要進(jìn)一步檢測(cè)。此外，對(duì)兩歲以下兒童進(jìn)行IAA檢測(cè)也是有必要的。因此，3 Screen + IAA的測(cè)試策略更適合非常年幼的兒童。
參考文獻(xiàn)：T?rn C, Vaziri-Sani F, Ramelius A, Elding Larsson H, Ivarsson SA, Amoroso M, Furmaniak J, Powell M, Smith BR. Evaluation of the RSR 3 screen ICA™ and 2 screen ICA™ as screening assays for type 1 diabetes in Sweden. Acta Diabetol. 2022 Jun;59(6):773-781.
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