小鼠單克隆抗體制備流程
更新時間：2020-09-18 點擊次數(shù)：654次
小鼠單克隆抗體的相關(guān)內(nèi)容介紹：
單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)的，雜交瘤細(xì)胞是由一個經(jīng)抗原激活后的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成。單克隆抗體優(yōu)點：純度高，靈敏度高，特異性強(qiáng)，交叉反應(yīng)少，制備的成本低。缺點：對技術(shù)有一定的要求，而且通過抗原的化學(xué)處理很容易丟失表位。
單克隆抗體技術(shù)可應(yīng)用在：蛋白質(zhì)的精細(xì)結(jié)構(gòu)研究、淋巴細(xì)胞亞群的表面新抗原分析、組織相容性抗原檢測、激素和藥物的免疫分析、腫瘤的定位和分類、純化微生物和寄生蟲抗原、免疫治療和與藥物結(jié)合的免疫—化學(xué)療法等。其中在免疫治療的應(yīng)用中，單克隆抗體藥物發(fā)揮了重要作用：利用單克隆抗體與靶細(xì)胞特異性結(jié)合，可將藥物帶至病灶部位，可直接用于人類疾病的診斷、預(yù)防、治療以及免疫機(jī)制的研究，為腫瘤的免疫診斷與免疫治療開辟了廣闊的前景。
小鼠單克隆抗體制備流程：
1.抗原準(zhǔn)備：原核表達(dá)蛋白抗原，或者設(shè)計合成多肽并偶聯(lián)KLH。選擇原核表達(dá)蛋白抗原的客戶，可自己提供純化好的抗原（純度>85%），拓普生物也能為你純化蛋白，從構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒，到獲得純化蛋白。選擇多肽偶聯(lián)的客戶，抗原由拓普生物準(zhǔn)備，合成。
2.抗原免疫：免疫4只balb/c小鼠，并通過標(biāo)準(zhǔn)程序加強(qiáng)免疫，尾部采血進(jìn)行ELISA檢測，驗收標(biāo)準(zhǔn)為血清ELISA>10,000。
3.細(xì)胞融合和篩選：顯示較佳免疫應(yīng)答的balb/c小鼠，將其脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，通過HAT選擇性培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞。
4.雜交瘤細(xì)胞篩選：有限稀釋法對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選，對2-5個陽性母細(xì)胞進(jìn)行亞克隆，并選一個亞克隆做亞型鑒定。
5.單克隆抗體大量制備：選擇一個陽性克隆腹腔注射到5只balb/c小鼠進(jìn)行腹水生產(chǎn)。
6.單克隆抗體純化：使用ProteinA/G純化抗體，并用ELISA檢測抗體效價。
小鼠單克隆抗體注意事項：
1.請根據(jù)實驗需要選擇適工作效價，部分實驗根據(jù)具體實驗情況可在推薦工作效價基礎(chǔ)上進(jìn)行增加或減小。
2.短期保存的抗體：如抗體幾周內(nèi)就會使用，收到后推薦在2-8℃保存，2-8℃短暫保存數(shù)周對抗體活性沒有影響。
3.長期保存的抗體：如抗體需超過1個月后才會使用，請酌情分裝后于-20℃保存。
4.建議：將抗體保存在冰箱里層，避免溫度變化造成反復(fù)凍融。
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